WWW.MASH.DOBROTA.BIZ
БЕСПЛАТНАЯ  ИНТЕРНЕТ  БИБЛИОТЕКА - онлайн публикации
 

«Служба клиентской поддержки: 8 (800) 200-75-15 (звонок по России бесплатный) E-mail: hotline Регистрационное удостоверение № РЗН 2017/5309 ...»

117587, Москва, Варшавское ш., д.125ж, корп.6

Тел./факс +7 (495) 640-17-71

Служба клиентской поддержки: 8 (800) 200-75-15

(звонок по России бесплатный)

E-mail: hotline@dna-technology.ru,

www.dna-technology.ru

Регистрационное удостоверение

№ РЗН 2017/5309

Комплект реагентов для выделения фетальной ДНК из крови матери

ПРОБА-НК-ФЕТ

Информация о комплекте

1 НАЗНАЧЕНИЕ

1.1 Комплект реагентов предназначен для выделения фетальной ДНК (ДНК плода) из крови матери .

Полученный препарат фетДНК будет содержать небольшое количество геномной ДНК матери .

1.2 Комплект может быть использован в клинико-диагностических лабораториях медицинских учреждений и научно-исследовательской практике .

1.3 Комплект рассчитан для выделения фетальной ДНК из 50 анализируемых образцов (включая отрицательные контрольные образцы) (таблица 1) .

Таблица 1 ПРОБА-НК-ФЕТ Материал для Периферическая кровь исследования Количество определений

2 ХАРАКТЕРИСТИКА КОМПЛЕКТА

2.1 Состав комплекта Реактив Количество Лизирующий раствор1 15 мл 1 флакон Реагент для преципитации 30 мл 1 флакон Промывочный раствор №1 25 мл 1 флакон Промывочный раствор №2 15 мл 1 флакон Буфер для растворения 1,4 мл 2 пробирки Депротеинизирующий раствор2 1,0 мл 1 пробирка Отрицательный контрольный образец 13,5 мл 1 флакон

2.2 Время проведения выделения – от 2 часов .



3 МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

Организация работы ПЦР-лаборатории, оборудование и материалы должны соответствовать Методическим указаниям МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I – IV групп патогенности» и санитарно-эпидемиологическим правилам СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами IIIIV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». Исследуемые образцы рассматриваются как потенциально опасные .

Утилизировать неиспользованные реактивы, реагенты с истекшим сроком годности, а также использованные реагенты и биологический материал необходимо в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами» .

Примечание. Комплект реагентов не содержит материалов биологического происхождения, веществ, обладающих канцерогенным, мутагенным действием, а также влияющих на репродуктивную функцию человека. При использовании по назначению и соблюдении мер предосторожности является безопасным .

4 МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ

При работе с комплектом реагентов ПРОБА-НК-ФЕТ требуются следующие оборудование и материалы:

центрифуга для пробирок объёмом 4,5 мл, с RCF не ниже 1150 g, например, центрифуга ЕВА 20 Hettich (3461g или 6000 об/мин);

центрифуга для пробирок объёмом 1,5 мл, с RCF не ниже 17000 g, например, центрифуга HERAEUS pico17 (17000 g или 13300 об/мин);

термостат твердотельный, поддерживающий температуру от 65 °С до 98 °С;

При хранении допускается выпадение небольшого количества осадка в лизирующем растворе, который растворяется при прогревании лизирующего раствора при 65 °С .

При хранении допускается выпадение небольшого количества осадка в депротеинизирующем растворе, что не влияет на качество выделенной фетДНК .



микроцентрифуга/вортекс;

холодильник бытовой c морозильной камерой;

насос с колбой–ловушкой для удаления надосадочных жидкостей;

контейнер для замораживания, например, штатив IsoFreeze 24х1,5/2 мл, SSI, или штатив CoolRack M15, 15х1,5/2 мл, Biocision, или другое аналогичное оборудование;

пробирки одноразовые пластиковые объёмом 1,5 мл;

штатив «рабочее место» для пробирок объёмом 1,5 мл;

дозаторы полуавтоматические одноканальные с переменным объёмом, позволяющие отбирать объёмы жидкости 2–20 мкл, 20–200 мкл, 200–1000 мкл;

одноразовые наконечники с фильтром для полуавтоматических дозаторов, свободные от РНКаз и ДНКаз, объёмом 20 мкл, 200 мкл, 1000 мкл;

одноразовые перчатки медицинские, без талька, текстурированные;

ёмкость для сброса использованных наконечников, пробирок и других расходных материалов;

вакуумные пластиковые пробирки типа Vacuette с ЭДТА .

5 ВЗЯТИЕ И ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ

5.1 Взятие цельной периферической крови Взятие цельной периферической крови проводится в вакуумные пластиковые пробирки типа Vacuette объёмом 4,5 мл с добавленной в качестве антикоагулянта динатриевой солью этилендиаминтетраацетата (ЭДТА) в конечной концентрации 2,0 мг/мл. Для перемешивания крови с антикоагулянтом после взятия материала необходимо перевернуть пробирку 2-3 раза. Необходимый объём крови составляет 4,0 - 4,5 мл .

Внимание! Не допускается использование гепарина и цитрата натрия в качестве антикоагулянта .

5.2 Транспортирование и хранение исследуемого материала Рекомендуется начать обработку крови в первые два часа после ее взятия .

В случае невозможности проведения обработки крови в течение 2 часов допускается её хранение при температуре от 18 °С до 25 °С не более 8 часов .

5.3 Подготовка исследуемого материала 5.3.1 Центрифугируйте пробирки с кровью при 2000 об\мин в течение 20 мин при комнатной температуре (от 18 °С до 25 °С) .

5.3.2 Промаркируйте необходимое количество пробирок объёмом 1,5 мл (по две для каждого исследуемого образца крови) .

5.3.3 Не задевая нижнюю (клеточную) фракцию, отберите автоматическим дозатором по 900 мкл верхней фракции (плазма) и перенесите в две соответствующим образом промаркированные пробирки .

Внимание! Для выделения ДНК используется только одна пробирка! Вторая пробирка может быть заморожена при минус 20 °С и, при необходимости, использована для повторного выделения ДНК .

Полученная плазма готова для выделения фетДНК .

До начала выделения пробирки с плазмой могут храниться при температуре от 4 °С до 8 °С в течение 8 часов .

При планировании выделения фетДНК на следующий день или позже, пробирки с плазмой необходимо заморозить при минус 20 °С. Замороженная плазма может храниться не более 3 месяцев. Перед началом выделения по одной пробирке каждого образца необходимо разморозить при комнатной температуре .

6 ВЫДЕЛЕНИЕ ФЕТАЛЬНОЙ ДНК ИЗ ПЛАЗМЫ





Перед началом работы необходимо достать из холодильника комплект реагентов для выделения фетальной ДНК ПРОБА-НК-ФЕТ и проконтролировать отсутствие осадка в лизирующем растворе. В случае выпадения осадка лизирующий раствор следует прогреть при 65 °С до полного растворения осадка .

Пробирку с депротеинизирующим раствором необходимо выдержать при комнатной температуре 15минут, затем перемешать в течение 10–15 сек и центрифугировать в течение 1–3 сек на микроцентрифуге/вортексе .

Примечание. Выпадение небольшого количества осадка допустимо и не влияет на качество депротеинизирующего раствора .

На данном этапе используйте только наконечники с фильтром, свободные от РНКаз и ДНКаз .

6.1 Подготовьте к выделению фетДНК образцы плазмы из 5.3 (при необходимости разморозьте при комнатной температуре) .

6.2 Промаркируйте одну пробирку объёмом 1,5 мл «K–» и внесите в неё 900 мкл отрицательного контрольного образца .

6.3 Добавьте в каждую предназначенную для выделения ДНК пробирку с плазмой и в пробирку «K-» по 18 мкл депротеинизирующего раствора .

Внимание! Депротеинизирующий раствор обладает повышенной вязкостью, в связи с чем его необходимо набирать в наконечник пипетки в течение 3-5 сек и наносить на стенку пробирки (отдельным наконечником для каждого образца) .

6.4 Плотно закройте крышки пробирок, встряхните пробирки в течение 10-20 сек и центрифугируйте в течение 1–3 сек на микроцентрифуге/вортексе .

6.5 Термостатируйте при температуре 98 °С в течение 5 мин .

Внимание! При прогревании пробирок возможно открывание крышек! Рекомендуется использовать пробирки с защёлкивающимися крышками (например, Eppendorf Safe-Lock Tubes) или программируемые термостаты с прижимной крышкой (например, термостат «Гном» производства ООО «НПО ДНК– Технология») .

Примечание. В случае если не используется специализированный штатив, необходимо подготовить ледяную баню. Ледяная баня состоит из ёмкости, в которую насыпается кусковой лёд из воды, помещается штатив для пробирок c открытым дном и наливается холодная вода. Ледяная смесь не должна доходить до крышек пробирок приблизительно 5 мм .

6.6 Поместите пробирки в охлаждающий штатив на 10 мин .

Внимание! Пробирки необходимо перенести в штатив сразу после термостатирования! Хранение пробирок не допускается, поскольку может привести к получению недостоверных результатов .

6.7 Осушите пробирки бумажной салфеткой. Центрифугируйте пробирки при 13300 об/мин в течение 25 мин при комнатной температуре .

6.8 Промаркируйте для каждого исследуемого образца и отрицательного контрольного образца «К–» по новой пластиковой пробирке объёмом 1,5 мл .

6.9 Отберите по 300 мкл супернатанта (из пробирки, маркированной «K-», 300 мкл раствора) и перенесите в соответствующие промаркированные пробирки .

Внимание! Если объём супернатанта менее 300, но более 100 мкл, отберите и перенесите весь объём .

Если объём супернатанта менее 100 мкл, то, возможно, предыдущие этапы выделения фетДНК проведены некорректно (неправильные условия хранения крови или плазмы, несоответствие скоростных и временных условий центрифугирования образцов, несоблюдение температурных режимов). В этом случае необходимо провести повторное выделение фетДНК из дополнительной пробирки с плазмой или повторное взятие крови у пациентки .

6.10 Добавьте в каждую пробирку по 300 мкл лизирующего раствора, не касаясь края пробирки. Закройте крышки пробирок .

6.11 Встряхните пробирки на вортексе в течение 3–5 сек, осадите капли центрифугированием на вортексе в течение 30 сек .

6.12 Термостатируйте пробирки при температуре 65 °С в течение 15 мин, осадите конденсат центрифугированием на вортексе в течение 30 сек .

6.13 Добавьте в каждую пробирку по 600 мкл реагента для преципитации, встряхните пробирки на вортексе в течение 3–5 сек .

Внимание! После добавления реагента для преципитации, пробирки необходимо выдержать в горизонтальном положении в течение 7-10 мин, однократно встряхнув на микроцентрифуге/вортексе в течение этого времени .

6.14 Центрифугируйте пробирки при 13300 об/мин в течение 15 мин при комнатной температуре .

6.15 Не задевая осадок, полностью удалите надосадочную жидкость (отдельным наконечником из каждой пробирки) .

6.16 Добавьте к осадку 500 мкл промывочного раствора №1 и перемешайте на вортексе в течение 3-5 сек .

6.17 Центрифугируйте пробирки при 13300 об/мин в течение 5 мин при комнатной температуре .

6.18 Не задевая осадок, полностью удалите надосадочную жидкость (отдельным наконечником из каждой пробирки) .

6.19 Добавьте к осадку 300 мкл промывочного раствора №2 и перемешайте на вортексе в течение 3-5 сек .

6.20 Центрифугируйте пробирки при 13300 об/мин в течение 5 мин при комнатной температуре .

6.21 Не задевая осадок, полностью удалите надосадочную жидкость (отдельным наконечником из каждой пробирки) .

6.22 Откройте крышки пробирок и высушите осадок при температуре 65 °С в течение 1 мин .

6.23 Добавьте к осадку 35 мкл буфера для растворения, закройте крышки и прогрейте пробирки при температуре 65 °С в течение 10 мин. Перемешайте на вортексе в течение 3-5 сек .

6.24 Осадите капли центрифугированием пробирок при 13300 об/мин в течение 30 сек при комнатной температуре .

Полученный препарат ДНК готов для проведения ПЦР. Препарат ДНК можно хранить при температуре минус 20 °С не более 3 месяцев или при температуре минус 70 °С не более 1 года .

7 УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ, ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ КОМПЛЕКТА

7.1 Срок годности комплекта – 12 месяцев со дня приёмки ОТК предприятия-изготовителя при соблюдении всех условий транспортирования, хранения и эксплуатации .

7.2 Комплект реагентов следует хранить при температуре от 2 °С до 8 °С в течение всего срока годности .

Примечание. При хранении допускается выпадение небольшого осадка в лизирующем и депротеинизирующем растворе .

7.3 Транспортирование комплекта осуществляют всеми видами крытого транспорта при температуре от 2 °С до 8 °С в течении всего срока годности комплекта .

7.4 Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению комплекта .

7.5 Комплект с истекшим сроком годности использованию не подлежит .

8 УКАЗАНИЯ ПО УТИЛИЗАЦИИ

8.1 Комплекты, пришедшие в непригодность, в том числе в связи с истечением срока годности и неиспользованные реактивы, подлежат утилизации в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.7.2790-10 и МУ 1.3.2569-09 .

8.2 Непригодные для использования комплекты реагентов, упаковка комплектов реагентов (пробирки, флаконы, полиэтиленовые пакеты с замком и коробки из картона) относятся к отходам класса А и утилизируется с бытовыми отходами .

По вопросам, касающимся качества комплекта реагентов для выделения фетальной ДНК из крови матери (ПРОБАНК-ФЕТ), следует обращаться к официальному представителю производителя по адресу:

ООО «ДНК-Технология», 117587, Москва, Варшавское шоссе, д.125ж, корп.6, тел./факс +7 (495) 640-17-71, www.dna-technology.ru Служба клиентской поддержки: 8 (800) 200-75-15 (звонок по России бесплатный), E-mail: hotline@dna-technology.ru

Анкета для осуществления обратной связи находится на сайте компании «ДНК-Технология»:

http://www.dna-technology.ru/customer_support/

Адрес производителя:

ООО «ДНК-Технология ТС», Россия, 117246, Москва, Научный проезд, д. 20, стр. 4 .

Место производства:

Код изготовителя указан на этикетке (см. последнюю цифру в серии набора):

1. ООО «НПО ДНК-Технология», Россия, 142281, Московская обл., г. Протвино, ул. Железнодорожная, д. 20 .

2. ООО «ДНК-Технология ТС», Россия, 117246, Москва, Научный проезд, д. 20, стр. 4 .

–  –  –






Похожие работы:

«ГЕРОНТОЛОГИЯ научно-практический журнал, 2015, Т. 3, № 1 GERONTOLOGY Scientific Journal, 2015, Vol. 3, № 1 ISSN 2307-4248 СОЦИАЛЬНАЯ ГЕРОНТОЛОГИЯ УДК 616.1:613.98 ТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ СРЕДА И ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЕ ОБ...»

«21 “ Ві с н и к с т ом ат о л ог і ї ”, № 4, 2 01 6 УДК:616.724 – 002.2 – 08 arthritis of the temporomandibular joint that occured as a result of disoder in occlusive interrelations of upper...»

«МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР ГЛАВН ОЕ С А Н И Т А Р Н О -Э П И Д Е М И О Л О Г И Ч Е С К О Е УП РАВЛ ЕНИЕ ПОРЯДОК НАКОПЛЕНИЯ, ТРАНСПОРТИРОВКИ, ОБЕЗВРЕЖИВАНИЯ И ЗАХОРОНЕНИЯ ТОКСИЧНЫХ ПРОМЫШЛЕННЫХ ОТХОДОВ (САНИТАРНЫЕ ПРАВИЛА) черное кружево купить МИНИСТЕР...»

«ГЕРОНТОЛОГИЯ научно-практический журнал, 2016, Т. 4, № 1 GERONTOLOGY Scientific Journal, 2016, Vol. 4, № 1 ISSN 2307-4248 УДК 616.379-008.64 ПРОФИЛАКТИКА ПАДЕНИЙ У ЛИЦ ПОЖИЛОГО ВОЗРАСТА, СТРАДАЮЩИХ САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ ВТОРОГО ТИПА Бахмутова Ю.В....»

«213 Вестник СамГУ — Естественнонаучная серия. 2006. №9(49). УДК 116.33/34-089 БЛИЖАЙШИЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ХИРУРГИЧЕСКОГО ЛЕЧЕНИЯ ПАЦИЕНТОВ С ПРОБОДНОЙ ЯЗВОЙ ЖЕЛУДКА И ДВЕНАДЦАТИПЕРСТНОЙ КИШКИ МЕТОДОМ ТАМПОНАДЫ САЛЬНИКОМ ПО ПОЛИКАРПОВУ А.В. Лопатников1 © 2006 Изучены результаты лечения 162 больных...»

«Зарегистрировано в Минюсте России 3 июля 2017 г. N 47273 МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ПРИКАЗ от 15 июня 2017 г. N 328н О ВНЕСЕНИИ ИЗМЕНЕНИЙ В КВАЛИФИКАЦИОННЫЕ ТРЕБОВАНИЯ К МЕДИЦИНСКИМ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИМ РАБОТНИКАМ С ВЫСШИМ ОБРАЗОВАНИЕМ ПО НАПРАВЛЕНИЮ ПОДГОТОВКИ ЗДРАВООХРАНЕНИЕ И МЕДИЦИНСКИЕ...»

«776 Хроматографический анализ жирных кислот клеточных стенок бифидобактерий с различной гидрофобностью Захарова Ю.В., Сухих А.С . ГБОУ ВПО "Кемеровская государственная медицинская академия" Минздрава РФ, Кемерово Поступила в редакцию 23.06.2015 г. Жирные кислоты клеточной мембраны Bifidobacterium bifidum проанализированы методо...»

«Ю. В. Б р о м л е й, А. А. В о р о н о в НАРОДНАЯ МЕДИЦИНА КАК ПРЕДМЕТ ЭТНОГРАФИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИИ Народная медицина в последнее время привлекает к себе все более пристальное внимание. Традиционный опыт народов мира в области ме­ ди...»




 
2019 www.mash.dobrota.biz - «Бесплатная электронная библиотека - онлайн публикации»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.