WWW.MASH.DOBROTA.BIZ
БЕСПЛАТНАЯ  ИНТЕРНЕТ  БИБЛИОТЕКА - онлайн публикации
 

«РОЗАНОВА ОЛЬГА ЕГОРОВНА ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ПАТОГЕНЕЗА АПЛАСТИЧЕСКОИ АНЕМИИ: РОЛЬ ЦИТОКИНОВ ...»

На правах рукописи

РОЗАНОВА ОЛЬГА ЕГОРОВНА

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ПАТОГЕНЕЗА

АПЛАСТИЧЕСКОИ АНЕМИИ: РОЛЬ ЦИТОКИНОВ

14.00.29- гематология и переливание крови

14.00.36 - аллергология и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

доктора биологических наук

Санкт-Петербург

Работа выполнена в ФГУ «Российский ордена Трудового Красного Знамени, ордена Дружбы народов научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального агенства по здравоохранению и социальному развитию»

Научные консультанты:

доктор медицинских наук, профессор Бубнова Людмила Николаевна заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор Абдулкадыров Кудрат Мугутдинович

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Харченко Марина Федоровна доктор медицинских наук, профессор Тотолян Арег Артемович доктор медицинских наук, профессор Богданов Александр Николаевич Ведущее научное учреждение: ФГУ научно-исследовательский институт Детской гематологии Росздрава (ФГУ НИИДГ Росздрава)

Защита состоится " 27 " марта 2006 г. в 13.00 часов на заседании диссертационного совета Д 208.074.01 в Российском НИИ гематологии и трансфузиологии Росздрава по адресу: 193024, Санкт-Петербург, ул. 2-я Советская, д. 16 .



С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Российского НИИ гематологии и трансфузиологии .

Л- оХ Автореферат разослан ЙЯ" U*. 2006 г

Ученый секретарь диссертационного совета ^7 доктор медицинских наук Z?v т; g, Глазанова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы .

Известно, что многие цитокины относятся к разряду гемопоэтических факторов, являются неотъемлемой частью нормального кроветворения и оказывают влияние на все его этапы. В зависимости от характера этого влияния их условно разделяют на позитивные и негативные регуляторы гемоноэза. К позитивным регуляторам относятся те факторы, которые поддерживают пролиферацию стволовой кроветворной клетки (СКК), лимфоидных, эритроидных, гранулоцитарных, моиоцитарных предшественников, стимулируя соответствующие ростки кроветворения. Это, прежде всего, различные колониестимулирующие факторы (КСФ), эритропозтип (ЭПО), интерлейкнны (ИЛ)-1, 3, б, 1 1 и т.д. Другие цитокииы, такие, как фактор некроза опухоли (ФНО), интерферон (ИФН), трансформирующий фактор роста (ТФР), напротив, могут снижать клоногенность всех типов предшественников гемопоэтических клеток, в силу чего они способны подавлять эритро-, моно-, грапулопоэз и, по мнению большинства исследователей, относятся к безусловно негативным регуляторам гемопоэза (Орловская И. А. и соавт., 1996; Li W.M. et al., 2000;

Deeg H.J. et al., 2000). Исследование гемопоэтических факторов является наиболее актуальным при заболеваниях, связанных с нарушением гемопоэза, к которым, несомненно, относится апластическая анемия .

Ашгастическая анемия (АА) является одной из самых сложных проблем современной гематологии. Это редкое и тяжелое заболевание системы крови с высоким процентом инвалидизации и смертности больных (Абдулкадыров К.М, Бессмельцев С.С .



, 1995; Rosenfeld S. et al., 2003). Характерным признаком АА является гипоклеточность костного мозга и панцитопения в периферической крови. Это глобальная трехростковая недостаточность гемопоэза, в основе которой, по современным представлениям, лежит прямое или опосредованное повреждение стволовой кроветворной клетки, приводящее к дисбалансу между основными процессами, составляющими нормальный гемопоэз: пролиферацией, дифференнировкой и клеточным апоптозом. Однако, несмотря на более, чем 100-летшою историю изучения АА, механизмы, приводящие к подобному повреждению, до сих пор окончательно пе установлены .

Среди основных концепций развития депрессии кроветворения при данном заболевшши, наряду с прямым поражением стволовой клетки и дефектностью гемопоэтического микроокружения, важное место занимает гипотеза о том, что повреждение клеток (как стволовых кроветворных, так и микроокружения) может вызываться и поддерживаться иммунологическими механизмами. Концепция иммунного патогенеза АА привлекает к себе внимание все большего числа исследователей. Это представляется обоснованным в силу ряда обстоятельств. Во-первых, именно иммуносупрессивная терапия, вне зависимости от концептуального подхода, в больашнетве случаев приводит к положительным результатам. Во-вторых, имеипо клетки иммунной системы являются основными продуцентами большинства вышеперечисленных гемопоэтических факторов, которые, как известно, оказывают влияние на процессы пролиферации, дифференцировки и апоптоза, ряупируя, таким образом, гемопоэз, если в качестве клетокмишеней служат гемопоэтические гфедшественники .

К сожалению, отечественные исследователи практически не запимаются проблемами цитокинопосредованных процессов при АА .

Однако в зарубежной литературе за последнее десятилетие появилось достаточно много сообщений по этому вопросу (Teramura M., Mizoguchi H., 1996; Young N.S., 2002; Sleijfer S.,p Lugtenburg P.J., 2003; Dubey S. ct al., 2005) .

Тем не менее, несмотря на бесспорный прогресс в понимании механизмов развития АА, вопрос о единой и общепризнанной теории патогенеза заболевания нельзя считать решенным. До сих пор не выработано единого мнения по поводу уровня гемопоэтинов при АА. Несмотря на признанную роль цитокинов в регуляции i-емоиоэза, комплексная оценка степени нарушения цитокинового статуса больных АА до сих пор отсутствует. И несмотря на известный постулат, что кроветворение в норме обеспечивается сбалансированным комплексом как позитивных, так и негативных цитокиновых сигналов, до снх пор не определено соотношение основных стимулирующих и ишибирующих цитокинов у больных АА и их динамика в процессее терапии. Не выяснена связь между нарушениями цитокипового, иммунного статусов и тяжестью депрессии кроветворепия больных» а, следовательно, не определены их значимость и место в механизме развития болезни .

В связи с этим, исследование сиптеза и соотношения цитокинов, которые продуцируются клетками иммунной системы и одновременно влияют на гемопоэз, являясь его позитивными и негативными регуляторами, в норме и при АА представляется актуальным и способствующим выяснению роли иммунной системы в формировании депрессии кроветворения .





Цель исследования .

Установление роли иммунных механизмов в формировании депрессии кроветворения при апластической анемии, совершенствование диагностики, критериев прогноза течения заболевания и эффективности иммуносупрессивной терапии на основе новых ЗЕШГИЙ О цитокинопосредованных нарушениях иммунной регуляции гемопоэза .

Задачи исследования .

1. Изучить особенности иммунного статуса больных АА в зависимости от тяжести заболевания .

2. Исследовать уровень и продукцию мононуклеарами периферической крови и костного мозга больных АА позитивных гемопоэтических факторов: ЭПО, ИЛ- 1р, ИЛ-3 и ИЛ-6 .

3. Исследовать продукцию мононуклеарами периферической крови и костного мозга больных АА негативных гемопоэтических факторов:

. ИФН7 и ФНОа .

4.' Исследовать продукцию мононуклеарами периферической крови и костного мо-на больных АА антагониста негативных регуляторов ИЛ-4 и фактора роста Т-лимфоцитов ИЛ-2 .

5. Определить соотношение основ1Гых оппозитных цитокипов в норме и при АА .

6. Установить взаимосвязь между нарушениями пнтокинового, иммуппого статусов и тяжестью депрессии кроветворения больных АА .

7. Исследовать динамику основных регуляторов гемопоэза в зависимости от эффективности иммуносупрессивной терапии больных АА .

8. Исследовать соотношение основных позитивных и негативных регуляторов гемопоэза и изменение иммунофенотипических характеристик цитокиннродуцируюпдих клеток больных АА в ремиссии и рецидиве заболевания .

Научная новизна .

Впервые на основании сравнительного анализа способности мононуклеаров периферической крови и костного мозга к продукции гемопоэтнческих факторов - цитокинов - дана комплексная оценка нарушений цитокипового статуса больных АА и установлено соотношение основных позитивных и негативных регуляторов гемопоэза в норме и при АА. Показано, что в норме интенсивность синтеза позитивного фактора ИЛ-6 превалирует над синтезом других цитокипов, тогда как при АА приоритеты смещаются в сторону негативного регулятора ФНОа, интенсивность синтеза которого становится доминирующей как в периферической крови, так и в костном мозге;

Впервые охарактеризована динамика соотношения оппозигпых цитокинов 'в процессе заболевания: в стадии полной клиникогематологической ремиссии и рецидиве, - а также проанализированы соответствующие этим стадиям изменения иммунофенотипических характеристик цитокинлродуцирующих клеток периферической крови и костного мозга больных АА .

Дана оценка иммунного статуса больных АА в соответствии с тяжестью депрессии кроветворения и динамикой заболевания. Выявлены неизвестные ранее взаимосвязи между соотношением иммунорегуляторных субнопуляций лимфоцитов периферической крови и костного мозга и степенью нарушения гемопоэза. Установлено, что субпопуляция CD4+ Т-хелперов I класса (ТЫ) является преобладающей при тяжелой форме АА, а также в рецидиве заболевания .

На основании комплексного анализа выявленных взаимосвязей между нарушениями цитокинового, иммунного статусов и тяжестью депрессии гемопоэза установлена роль иммунной системы в развитии аплазии кроветворения при АА. Показано, что одним из ведущих механизмов, лежащих в основе угнетения гемопоэза при данном заболевании, является цитокинопосредованная иммуносупрессия, обусловленная нарушением синтеза и соотношения основных регуляторных цитокинов, продуцируемых клетками иммунной системы: мононуклеарами периферической крови и костного мозга больных. Установлено, что депрессия кроветворения при АА вызвана не снижением секреции стимулирующих гемопоэтических факторов (ИЛ-ip, ИЛ-3, ИЛ-б), но, прежде всего, сверхвысокой продукцией ингибирующего цитокина ФНОа (который, при недостаточности своего антагониста ИЛ-4, способствует развитию депрессии гемопоэза), а также повышенной продукцией ИЛ-2, обеспечивающего сохранность и пролиферацию Т-лимфоцитов, активированные формы которых, в свою очередь, являются продуцентами негативных гемопоэтических факторов .

Впервые на основании анализа динамики основных регуляторных цитокинов в процессе лечения больных АА разработаны и предложены ранние прогостические критерии течения заболевания и эффективности иммуносупрессивяой терапии .

Практическая значимость .

Предложен комплекс иммунологических методов исследования, позволяющих определить особенности иммунного статуса больных апластической анемией в зависимости от тяжести депрессии кроветворения, дополнить диагностику различных ее форм (тяжелой и нетяжелой), а также выделить иммуиообусловлениые формы заболевания .

Разработаны алгоритм обследования цитокинового статуса больных апластической анемией и иммунологические критерии, позволяющие оценить эффективность проводимой иммуносупрессивной терапии .

Доказана значимость учета динамики основных регуляторных цитокинов, продуцируемых мононуклеарами больных апластической анемией, при прогнозировании течения заболевания па ранних сроках и при выборе адекватной иммутгосупрессивной терапии .

Апробация материалов диссертации .

Основные положения диссертационной работы были представлены па 12-ом Съезде Международного Общества Гематологов в 1993 году (Вена, Австрия), на Съездах Европейской Международной Ассоциации Гематологов (ЕНА): 1-ом (1994, Брюссель, Бельгия), 2-ом (1996, Париж, Франция), 4-ом (1999, Барселопа, Испапия), 5-ом (2000, Бирмингем, Великобритания), 7-ом (2002, Флоренция, Италия), на ежегодных Съездах Международного Общества Экспериментальной Гематологии (ISEH): 24-ом (1995, Дюссельдорф, Германия), 25-ом (1996, Нью-Йорк, США), 26-ом (1997, Каппы, Франция), 27-ом (1998, Ванкувер, Канада), на 20-й Международной Конференции Европейской группы Трансплантации костного мозга (Великобритания, 1994), на Международных паучпо-практических Конфереттиях «Актуальные проблемы гематологии» (2000 и 2003 гг .

, Минск, Беларусь), на Международной конференции «СПИД, рак и родственные проблемы» (2001, Санкт-Перербург, Россия), на Научнопрактических конференциях «Актуальные вопросы гематологии и i i.i..- '••••'..-.;•• •;:'!•'•-in., '"'s • ••.-•-;»трансфузнологии» (1996, 1998, 2002, 2004 гг., Санкт-Перербург), на Научнопрактической конференции «Новое в гематологии и клинической трансфузнологии» (2003, Москва), на Всероссийских научных конференциях «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (2003, 2004, 2005 гг.) .

Внедрение результатов исследования в практику .

Результаты диссертационной работы используются в практике Клиническою отдела химиотерапии гемобластозов, депрессий кроветворения и трансплантации костного мозга Российского НИИ гематологии и трансфузиояогии, в отделении гематологии Детсткой Городской больницы №1 г. Санкт-Петербурга, а также в лекциях и семинарских занятиях на обучающих циклах, проводимых Республиканским Центром иммунологического типирования тканей РосНИИГиТ.

Ио результатам исследований написаны и утверждены:

1. Пособие для врачей «Особенности иммунного статуса больных апластической анемией в зависимости от течения заболевания», 1997г .

2. Методические рекомендации «Комплексная оценка уровня цитокинов в периферической крови и костном мозге больных апластической анемией при прогнозировании течения заболевания», 2001 г .

Основные положения диссертации, выносимые на защиту .

1. Одним-из ведущих- механизмов формирования депрессии гемопоэза при апластической анемии является цитокикопосредованная иммуносупрессия, обусловленная нарушеинем синтеза и соотношения основных регуляторных цитокинов, продуцируемых клетками иммунной системы. Аплазия кроветворения при данном заболевании связанна, прежде всего, с тем, что мононуклеары периферической крови и костного мозга больных продуцируют сверхвысокое количество ингибирующего гемопоэз цитокипа ФНОа при недостаточном уровне его антагониста ИЛ-4 и повышенное количество ИЛ-2 .

2. Уровень эритропоэтина и продукция мононуклеарами периферической крови и костного мозга других позитивных гемопоэтических факторов (мультиКСФ - ИЛ-3, ИЛ-ip и ИЛ-б) при апластической анемии являются либо сопоставимыми с нормой, либо повышенными и не имеют патогенетического значения в развитии аплазии кроветворения .

3. В норме интенсивность синтеза позитивного фактора ИЛ-6 превалирует над синтезом других цитокинов, тогда как при апластической анемии приоритеты в продукции гемопоэтических факторов смещены в сторону негативного цитокина ФНОа, интенсивность синтеза которого моиопуклеарами периферической крови и костного мозга обусловливает тяжесть поражения гемопоэза .

4. Рецидив заболевания характеризуется прогрессией всех нарушений,:в соотношении цитокинов и цшхнеиннродуцируюгцих клеток, выявленных при АА в периферической крови и костном мозге; полная клиникогематологическая ремиссия характеризуется тенденцией к нормализации этих показателей, однако даже в состоянии ремиссии продукция ФНОа клетками иммунной системы остается повышенной .

5. Динамика основных регуляторных цитокинов в процессе иммупосупрессивнои терапии больных апластической анемией может служить критерием эффективности проводимого лечения и течения заболева!1ия .

Публикации .

По материалам диссертации опубликовано 38 научных работ .

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 223 страницах, состоит из введепия, 6 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы. Работа иллюстрирована 37 таблицами и 29 рисунками. Библиография включает 308 источников, из них 43 отечественных и 265 - зарубежных .

Личный вклад автора ' Автором" лично выполнены"; исследования по изучению уровня и продукции цитокинов клетками больных апластической анемией и доноров и иммуиофеибтипической характеристики лимфоидной популяции клеток .

Проведен учет, статистичекая обработка, анализ полученных данных, и обобщение результатов исследований .

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

ОБЪЕКТ, МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектом исследования служили 88 больных апластической анемией, 48 кадровых доноров крови и 22 донора костного мозга .

Характеристика обследованных больных. Группа больных апластической анемией (АА) была представлена 49 мужчинами и 39 женщинами в возрасте от 16 до 75 лет, находившимися на лечении в клиническом отделе химиотерапии гемобластозов, депрессий кроветворения и трансплантации костного мозга Российского НИИ гематологии и трапсфузиологии с 1992 по 2005 годы. Длительность заболевания к моменту обследования колебалась от двух недель до семи лет, в среднем составляя около 1 года. Указания на возможные этиологические факторы химической и физической природы (контакт с бензином, мазутом, лакокрасящими материалами, пестицидами, радиационными источниками и т.д.) имелись в анамнезе у 22 больных (25%). У 3 пациентов вероятна связь с перенесенным гепатитом В. Остальные 63 больных расценены как ; страдающие идиопатической формой заболевания .

Диагноз апластической анемии устанавливался на основании общепринятого комплекса клин ико-гематологических данных. Тяжестъ течения заболевапия определяли по критериям, разработанным Международной группой по изучению АА (классификация Camitta B.M.

et al, 1975, 1982), которые отражают степень депрессии кроветворения и включают в себя следующие показатели гемограммы:

1. Число грапулоцитов менее 0,5хЮ9/л

2. Число тромбоцитов менее 20x109/л

3. Уровень ретикулоцнтов менее 1% Наличие двух любых показателей из перечисленных выше в сочетании с аплазией костного мозга по данным трепанобиопсии (клеточность костного мозга не более 30% от нормы) свидетельствует о тяжелой форме АА .

Среди обследованных больных у 64 была диапюстирована тяжелая форма апластической анемии (ТАА) и у 24 - нетяжелая форма заболевания (НАА) .

Группу сравнения составили практически здоровые жители России. Для сопоставления иммунологических параметров периферической крови была обследоиала группа из 48 допоров крови Российского НИИ гематологии и трапсфузиологии (РосНИИГиТ) в возрасте от 22 до 55 лет. Для сопоставления иммунологических параметров костного мозга была обследована группа из 22 здоровых лиц в возрасте от 15 до 55 лет, из которых 10 человек являлись волонтерами, и 12 человек - совместимыми по антигенам системы HLA донорами костного мозга для аллогепных трансплантаций, проведенных в РосНИИГиТ в период с 1991 по 2003 годы .

Методы исследований. Для решения поставленных в работе задач был использован комплекс иммунологических методов исследования, включающий: 1) оиредсленисние иммунофенотипической характеристики лимфоидной популяции периферической крови и костного мозга с помощью ТАБЛИЦА 1 Характеристика дпфференцировочных антигенов Антиген Характеристика Зрелые Т-лимфоциты, Т-клеточный рецепторный комплекс CD3+CD4+ Т-лимфоциты (хелперы) CD8+ Т-лимфоциты (цитотоксические/супрессоры) CD20+ Зрелые В-лимфоциты, лиганд для CD45RO на Т-лимфоцитах CD16f FcryRIII, маркер NK-клеток CD25+ Рецептор к ИЛ-2 (IL-2R), маркер активации Т- и В-лимфоцитов .

HLA-DR Маркер активации Т-лимфоцитов, относящийся к антигенам HLA класса II CD95+ Fas-Ag, рецептор апоптоза моиоклональных аптител (МоАТ) к различным дифференцировочным антигенам (таблица- I) в- микроварианте лимфоцитотоксического теста (Исхакои А., 1988); 2) определение содержания иммуноглобулинов класса G, А, М в сыворотке крови стандартным методом радиальной иммунодиффузии в агарозиом геле по Mancini; 3) определение уровня циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови путем их осаждения в полиэтиленгликоле 5% концентрации (Hashkova V., 1978);

ТАБЛИЦА 2 .

Характеристика исследуемых цитокинов итокины Основные Основные гемопоэтические эффекты клетки-продуценты Т- и В-лнмфоциты, Стимулирует ППСК, гранулопоэз, ил-tp моноциты, макрофаги ингибирует поздние стадии эритропоэза

CD4* Т-лимфоциты:

ИЛ-2 Т-клеточный ростовой фактор ThO и Thl

Т-лимфоциты:

ИЛ-3 Мульти-КСФ: стимулирующее ТЫ и Th2 действие на 1ШСК и ранние стадии гемояоэза +

CD4 Т-лимфоциты:

ИЛ-4 Антагонист негативных регуляторов Th2 гемоиоэза: ингибирует продукцию ИФНу и ФНОа; фактор роста Вклеток Т-лимфоциты, Поддерживавает пролиферацию ИЛ-6 моноциты, макрофаги ППСК, стимулирует тромбо- и гранулопоэз CD4*(Thl)HCD8 + T- Ингибирует эритро-, тромбо- и ИФНу лимфоциты, ЕК гранулопоэз, активирует процессы апоптоза CD4 + (Thl),EK, Снижает кяонсгешюсть всех типов ФНОа предшественников гемопоэтических макрофа1-и клеток, активирует процессы апоптоза Обеспечивает выживаемость, Интерстициальные, ЭПО дифференцировку и пролиферацию перитубулярные или эндотелиапьцые(?) клеток эритроидного ряда капиллярные кл.почек, макрофаги, моноциты, кл. печени

4) изучение цнтокинового статуса с помощью стандартного метода твердофазного иммуноферментного апализа (ИФА): а) определение концентрации эритропоэтина (ЭПО) в сыворотке крови (тест-системы «R&D systems», США), б) исследование цитокм «продуцирующей активности клеток иммунной системы путем определения содержания различных гемопоэтических факторов (таблица 2) в супернатантах моионуклеарных клеток периферической крови и костного мозга после их 24часового культивирования в количестве 2х105/лунку при 37° с 5% С0 2 в присутствии специфических стимуляторов (индуцированная продукция) и без них (спонтанная продукция) (тест-системы ООО «Протеиновый контур», Санкт-Петербург и «Biosource International», США), Наличие спонтанной продукции какого-либо цитокина in vitro свидетельствует о предсуществующей активации клеток in vivo и отражает интенсивность синтеза цитокина, происходящего в организме без какого-либо дополнительного воздействия. Ответ иа индуктор in vitro отражает способность клеток отвечать in vivo на антигенную стимуляцию и свидетельствует о реактогенном потепциале организма .

Статистический анализ полученных результатов исследований проводили с помощью персонального компьютера с использованием пакета прикладных программ для "Microsoft-Excel", версия 7,0 для Windows 2000, применяя методы общей статистики (М — средняя арифметическая величина, nix - средняя ошибка средней, процентное распределение), сравнения двух величин по t-тесту Стыодеггга (Лакин Г., 1990), корреляционного анализа (Гублер Е.В., Генкин А.А., 1973) .

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Первый этап работы был посвящен исследованию особенностей иммунного статуса больных АА в зависимости от тяжести заболевания, то есть, от степени поражения гемопоэза .

При анализе иммунофенотипической характеристики лимфондной популяции установлено, что в периферической крови больных как тяжелой, ;

так и нетяжелой формой АА (рис.1) содержание клеток, экспрессируклцих основные дифферешшровочные антигены, является либо сопоставимым с нормой (за исключением CD8+ клеток), либо имеет тенденцию к снижению .

В отличие от этого, в костном мозге больных обеими формами АА (рис .

2) содержание основных субпопуляций лимфоцитов не только имеет тенденцию к повышению, но и повышено: выявлено 'значительное увеличение общей популяции Т-лимфоцитов (CD3+) у больных НАА и уровня CD3+, CD4+ и CD16+ клеток у больных ТАА .

–  –  –

Таким образом, анализ особенностей иммунного статуса больных АА в зависимости от тяжести заболевания позволил установить, что статистически значимые различия между группами болыгых с тяжелым и умеренным угнетением гемопоэза.*, были выявлены только по величине иммунорегуляторного индекса (рис 3), который при НАА был снижен до инверсии (CD4+/CD8+1) и ^периферической крови, и в костном моз^ (в отличие от ТАА, при которой он несколько превышал показатели контроля) .



Поскольку величина иммунорегуляторного индекса является интегральным показателем, по которому устанавливают иммунную недостаточность или иммунодефицит, выявляется парадоксальная, на первый взгляд, ситуация: если судить по величине индекса, то состояние иммунитета у больных с тяжелой депрессией кроветворения является лучшим, чем у пациентов с умеренным нарушением гемопоэза. Однако, указанный индекс характеризует соотношение основных иммунорегуляторных субпопуляций (CD4+ клеток-хелиеров и CD8+ ш-гготоксических клеток), и его повышение означает, что у больных с ТАА субпопуляция CD4+ лимфоцитов является преобладающей и в периферической крови, и в костном мозге .

–  –  –

Примечание: * - р0,05; ** - р0,01; *** - р0,001, различия достоверны по сравнению с группой доноров ч. -.

..-..,.•:

Что нее касается другого негативного гемопоэтического фактора ФНОа, то установлено резкое повышение его продукции клетками и костного мозга (табл.6), и периферической крови (табл.5) в 7 и 12 раз, соответственно .

Следует отмстить, что при исследовании негативных регуляторов гемопоэза (ФНОа и ИФН7), так же как и при изучении положительных факторов ИЛ-р и ИЛ-6 (но не ИЛ-3), выявлено существенное нарушение соотношения спонтанной и сгимулировагшой продукции цитокинов .

ТАБЛИЦА 6 Способность мононуклеаров костного мозга к продукции основных регуляторов гемолоэза в норме и при япластической анемии

–  –  –

715,9* ИЛ-6 189,4*11,7 2262,5^ 373,9* 2,8* 14,5*0,9 74,2 50,9 0,5*** 79,1***

–  –  –

17,5*1,2 1,8*0,1 10,0±0,7 ИЛ-4 12,7*1.1 9,5*0,5 1,5*0,1 1,4*0,1 1.4*0,2 30,8* ИЛ-2 46,6* 48,2* 20,4* 3.7 5,9 0.9 6,0 Примечание: * - р0,05; ** - р0,01; *** - р0,001, различия достоверны но сравнению с группой доноров Таким образом, мононуклеары периферической крови и костного мозга при АА характеризуются сверхвысокой выработкой негативного гемопоэтнческого фактора ФНОа .

Спонтанная продукция ИЛ-4 была сопоставима с нормой в костном мозге и существенно снижена в периферической крови. ИЛ-4 является прямым антагонистом ФНОа, и между этими двумя цитокинами выявлена обратная коррелятивная связь. Поэтому, в целом, учитывая характерную для АА гиперпродукцию ФНОсс, можно заключить, что клетки иммунной системы при данном заболевании синтезируют недостаточное количество антагониста негативных факторов — ИЛ-4 .

В отличие от этого, спонтанная продукция ИЛ-2 была повышена и в костном мозге, и в периферической крови. ИЛ-2 поддерживает жизпеспособпость и пролиферацию Т-лнмфоцитов, а в совокупности с повышенной экспрессией своего рецептора, выявлетюго на лимфоцитах при АА, обеспечивает защиту этой популяции от апоптогешюго влияния ФНОа .

Сравнивая уровни спонтанпой продукции цитокинов в группе доноров и в группе больных, можно прийти к выводу, что в норме интенсивность выработки позитивного фактора ИЛ-6 превалирует над синтезом других цитокинов как в периферической крови, так и в костном мозге (рис. 5) .

–  –  –

Примечание: МАА -средние показатели в группе больных АА;

M N - средние показатели в группе доноров (норма);

MAA/MN - показатель, характеризующий во сколько раз спонтанная продукция цнтокина в группе больных АА превышает норму данной категории больных либо не отличаюгея от нормальных величин, либо

- чаще - тоже существенно повышены .

Для того, чтобы выяснить, какие же из цитокинов являются доминирующими при АА, было проанализировано соотношение основных оппозитных цитокинов у каждого конкретного больного и в ipynne в целом .

Прежде всего, мы выделили группу тех больных АА, у которых продукция негативного регулятора ФНОсс мононуклеарами периферической крови в 10 и более раз превышала показатели нормы, и сопоставили ее с уровнями положительных факторов на тот же момент обследования, а также соотнесли их с показателями нормы (таблица 7). Из представленных данных видно, что столь высокому уровню ФНОа у больных данной группы далеко ие всегда соответствовали высокие значения оппозитных по гемопоэтическому. эффекту цитокинов - ИЛ-IP и ИЛ-6 - и никогда не соответствовали высокие значения прямого антагониста - ИЛ-4. То есть, несмотря на то, что показатели, характеризующие положительн ые гемопоэтическио факторы (ИЛ-ip и ИЛ-б) у конкретных больных могли быть самыми разнообразными - и приблизительно соответствующими норме (Б-ва, Из-ва), и повышенными (Г-нн), и высокими (Н-ич) - все больные характеризовались резким повышением продукции негативного регулятора гемопоэза ФНОа при евнженнии уровпя его антагониста - ИЛ-4 .

Следует отметить, что пе у всех больных АА продукция ФНОа более, чем в 10 раз превышала показатели нормы, по при широком разбросе данных (от 24 пг/мл до 2500 пг/мл), эта закономерность сохранялась для всей группы в целом как в периферической крови, так и в костном мозге (таблица 8). И если проследить величину среднего уровня спонтанной продукции цитокинов в группе больных (Мдд) по отношению к среднему уровню спонтанной продукции этих цитокинов в группе доноров (Мм), то есть M A A/M N, TO становится очевидным, что приоритеты в продукции цитокинов при АА смещаются в сторону негативного регулятора ФНОа, интенсивность синтеза которого становится доминирующей как в периферической крови, так и в костном мозге (рис. 6) .

–  –  –

Примечание: Млл/Мщ - показатель, характеризующий во сколько раз спонтанная продукция цитокнна при ЛА (МАЛ) превышает норму (Мм) Рис. б. Интенсив»осить синтеза основных оппозитных цнтокинов мононуклеарами периферической крови и костного мозга при АЛ Следует отметить, что, сопоставляя уровпи цитокинов у отдельных больных, мы не выявили статистически значимой корреляции между синтезом позитивных и негативных регуляторов, то есть между ИЛ-ip, ИЛ-6 и ФНОа .

Однако между ИЛ-4 и ФНОа была установлена достоверная (РОДИ) обратная коррелятивная связь, выявленная и в периферической крови (г - -0,67), и в костном мозге (г = -0,59). Вероятно, это связано с тем, что ИЛ-ip, ИЛ-6 и ФНОа являются противоположными цитокинами по гемопоэтическому эффекту и проявляют свои оппозитные эффекты опосредованно, а ИЛ-4 известен как прямой антагонист негативных регуляторов гемопоэза по механизму действия и непосредственно снижает выработку как ФНОа, так и ИФНу .

В экспериментальных исследованиях было показано, что ФНОа, наряду с ИФНу, способен нигибировать чувствительность клеток-предшественников к гемопоэтинам, блокируя на них соответствующие рецепторы, а ранее было установлено, что присутствие стимулирующих факторов (Г-КСФ, ГМ-КСФ, ИЛ-3 и ИЛ-6), которые добавляли в культуру клеток костного мозга больных АА и доноров, не улучшало гемопоэтических функций клеток больных, в отличие от здоровых. В связи с этим можно предположить, что высокий уровень ФНОа, продуцируемый клетками иммунной системы при АА, делает недоступными те или иные гемопоэтические факторы для клетокпредшественников и тем самым способствует угнетению кроветворения при данном заболевании. Показано также, что ФНОа является самым апоптогенным цитокином. Ингибируя чувствительность клетокпредшественников к позитивным гемопоэтическим факторам и активируя процессы апоптоза, ФНОа, таким образом, способен вызывать гипоклеточностъ костного мозга и папцитопению в периферической крови .

Выявленные закономерности позволяют предположить, что дигрессия кроветворения при АА обусловлена нарушением иммунной регуляции гемопоэза, а именно: дисбалансом синтеза и соотношения цитокинов, продуцируемых клетками иммунной системы, - и вызвана не снижением уровня положительных гемопоэтических факторов, но, прежде всего, ;

сверхвысокой продукцией негативного регулятора гемопоэза ФНОа (который, при недостаточном уровне своего антагониста ИЛ-4, способствует развитию депрессии кроветворения), а также повышенной продукцией ИЛ-2, поддерживающего сохранность и пролиферацию Т-лимфоцитов, активированные формы которых, в свою очередь, являются продуцентами негативных гемопоэтических факторов. То есть, механизмом,; лежащим в основе угнетения гемопоэза при АА, может быть цитокинопосредованная, иммуносупрессия .

Для того, чтобы подтвердить данное предположение, мы:изучили: вопервых, взаимосвязь между продукцией гемопоэтических факторов (прежде всего, негативного регулятора ФНОа) и тяжестью депрессии кроветворения больных АА, во-вторых, взаимосвязь между уровнем ФНОа и экспрессией маркера апоптоза CD95 и, в третьих, динамику основных регуляторов гемопоэза в зависимости от эффективности иммуносупрессивной терапии больных АА, в ремиссии и рецидиве заболевания .

Установлено, что даже при тяжелой депрессии кроветворения клетки иммунной системы больных синтезируют сопоставимое с нормой и повышенное количество положительных гемопоэтических факторов, а интенсивность синтеза негативного регуляч-ора ФНОа при обеих формах АА превалирует над синтезом других цитокипов как в периферической крови, так и в костном мозге (рис. 7) .

Примечание: МДД/MN - показатель, характеризующий во сколько раз спонтанная продукция цитокина при АА (Мдл) превышает норму (MN) Рис. 7. Интенсивность синтеза цитокинов _ мононуклерами периферической крови (А) и костного мозга (Б) в зависимости от тяжести заболевания .

Группы с нормальным гемопоэзом, умеренным и тяжелым угнетением гемопоэза достоверно различаются между собой только по одному параметру:

ФНОа (таблица 9). Спонтанная продукция данного ингибиторного цитокина у больных с умеренным угнетением кроветворения достоверно превышает таковую в группе с нормальным гемопоэзом, а у больных с тяжелым угнетением, гемопоэза она настолько велика, что делает статистически значимыми различия не только между группами больных и доноров, но и между группами больных с тяжелой и нетяжелой формой АА .

Это позволяет заключить, что тяжесть депрессии кроветворения при АА обусловлена, прежде всего, интенсивностью синтеза негативного регулятора

–  –  –

Уровень спонтанной продукция ФНОа и количество клеток, экспрессирующих маркер апоптоза, представлены в таблицах 10 и 11 .

Учитывая, что Fas экспрессируется на многих клетках» но аиоптозу подвергаются только активированные, мы сопоставили уровень спонтанной продукции ФНОа не только с количеством клеток, экспрессирующих маркер апоптоза (или преапо1гготических), но и с количеством активированных (DR+ н CD25+) клеток и соотпеелм это с различной тяжестью депрессии кроветвреиия больных АА .

Установлено, что как в периферической крови (таблица 10), так и в костном мозге (таблица И) сверхвысокой продукции апоптогенного цитокина ФНОа при ТАА соответствовало не только более выраженное и достоверной повышение количества CD95+- клеток, но Н статистически значимое повышение числа клеток, несущих маркеры активации (CD25+ и DR+). Проведение корреляционного анализа ерди указанных параметров подтвердило достоверную прямую взаимосвязь между величиной продукции ФНОа и количеством CD95+ клеток (г=0(564, р=0,0005 для периферической крови и r=0,511, р0,005 для костного мозга), а также между уровнем ФНОа и количеством активированных DR* клеток (r=0,368, р0,05 и г-=0,471, р0,005 для периферической крови и костного мозга, соответственно) .

ТАБЛИЦА 10 Спонтанная продукция ФНОа и содержание активированных (1R+ и С025+)и преапоптотических (CD954) клеток в периферической крови больных различными формами апластической анемии

–  –  –

На основании полученных данных мы не можем указать, какое число клеток точно подвергнется апоптозу. Выбор пути - выживание или апоптотическая гибель клетки зависит1 от наличия как проапоптотических, так и антиапоптотическнх рецепторов, а также от баланса внутриклеточных посредников соответствующих сишалои. Однако выявленная нами у больных АА положительная коррелятивная связь между интенсивностью синтеза клетками иммунной системы апоитогешюго цитокина ФНОа и количеством клеток, несущих маркеры активации (DR) и апоптоза (Fas/CD95), а также доказанное в экспериментах наличие экспрессии маркера активации (DR) и специфических рецепторов для индукции апоптоза (Fas/CD95) на CD344клетках, свидетельствуют о том, что в качестве одного из механизмов иммуносупресси гемопоэза при АА может иметь место цитокинопосредованная активация процессов клеточного апоптоза .

Характерную для АА сохранность популяции Т-лимфоцитов, по нашему мпепию, можно объяснить повышенной экспрессией на них рецептора к ИЛ-2 - CD25 и высоким уровнем ИЛ-2, выявленным у больных АА. Известно, что ИЛ-2 в высоких концентрациях, именно таких, при которых он обеспечивает жизнеспособность активированных Т-лимфоцитов, способен запускать механизмы 'защиты клеток от апоптоза .

При этом субпопуляция «профессиональных продуцентов цитокинов» - CD4+ Тлимфоцигов - является наиболее устойчивой к апоптотической гибели из-за конститутивной экспрессии у них большего количества Fas-ассоциированной фосфатазы - 1/FAP, которая участвует -в дефосфорилировапии' нитоплазматической части Fas, защищая клетку от Fas-опосредованного апоптоза. Таким образом, популяция Т-клеток при АА, будучи заполненной от апоптогенного влияния ФНОа, сама является активным продуцентом данного негативного гемопоэтического фактора .

Динамика основных регуляторов гемопоэза в зависимости от эффективности иммуносупрессивиой терапии больных АА циклоспорином А представлена на рис. 8 и 9 .

Известно, что циклоспорин А (ЦсА) ингибирует пролиферацию Тлимфоцитов, имея своей мишенью преимущественно CD4+ клетки, а также снижает выработку ИЛ-2 и, как было недавно установлено, ФНОа тоже. Это обстоятельство делает терапию больных АА данным препаратом весьма удобной моделью для подтверждения гипотезы о цитокинопосредованной иммуносупрессии кроветворпия при АА .

Анализ представленного в работе материала был проведен на основании обследования 45 больных АЛ в процессе иммуносупрессивной терапии циклоснорином-А (сандиммуном, производства фирмы СандозНовартис) в средних дозах 4-10 мг/кг массы тела в сутки перорально при длительности приема от 4 до 12 и более месяцев. Положительный эффект был получен у 33 (73,4%) из 45 больных АА, причем клиникагематологическое улучшение было отмечено у 6 пациентов (13,3%), частичная ремиссия у 15 (33,5%) и полная • клинико-гематологическая ремиссия - у 12 (26,6%) больных. Заметного эффекта от терапии сандиммуном достичь не удалось у 12 (26,6%) пациентов. Кроме того, у 8 больных с достигнутой ремиссией в последующем был отмечен рецидив заболевания .

Обязательный алгоритм исследований включал определение способности моно1гуклеаров периферической крови и костного мозга больных к продукции гемопозтических факторов, по крайней мере, трижды:

а момент постановки (или подтверждения) диагноза до лечения, в течение первых двух месяцев иммупосупрессивной терапии и по достижении частичной или полной ремиссии в случае успешного лечения. Отдельно был проведен анализ соотношения основных оппозитпых цитокинов и измиений иммунофенотипических характеристик мононуклеаров при рецидиве заболевания и при полной клинико -гематологаческой ремиссии .

Анализ динамики основных регуляторов гемопоэза в процессе иммуносупрессивной терапии больных АА, позволяет сделать вывод, что успешному лечению (рис. 8), с последующим выходом в частичную или полную клинико-гематологическую ремиссию, сопутствует снижение сверхвысокой интенсивности синтеза негативного peiyraropa гемопоэза •)Q СПОИТ, \ш индуцир .

–  –  –

ИГК2, Ш* РИС. $. Дипамнка продукции цитокинов монопуклеарами периферической крови (п/к) и костного мозга (к/м)'больных АЛ при успешной иммуиосупрессивнои терапии

--| О с понт .

ФНО-альфа.п^с

–  –  –

ИП-6,К/М Рис. 9. Динамика продукции цитокинов мононуклеарами периферической крови (п/к) и костного мозга (к/м) больных АА в процесса неэффективной иммунэсупрессивной терапии ФИОа, снижение исходно повышенной продукции фактора роста Тяимфоцитов ИЛ-2, восстановление (в костном мозге практически полное) соотношения уровней спонтанной и стимулированной продукции ИЛ-Ip, то есть нормализация не только интенсивности синтеза, но и реактогенного потенциала клеток в отношении данного цитокина, и активация - продукции позитивного фактора ИЛ-б. При неэффективной иммуносунрессивной терапии (рис. 9) наблюдается дальнейшее повышение интенсивности синтеза ФНОа и ИЛ-2, дальнейший подъем уровня спонтанной продукции ИЛ-lp и ИЛ-6 с ослаблением их реактог*еппого потенциала .

Анализ соотношения основных оппозитных цитокинов в динамике заболевания (ремиссии и рецидиве), а также соответствующие этим двум стадиям изменения иммунофепотипической характеристики цитокинпродуцирующих клеток позволили выявить определенные закономерности .

Как было установлено, при АА приоритеты в продукции цитокинов, в отличие от нормы, перемещаются с ИЛ-6 в сторону ФНОа (рис. 11), а уровень продукции ФНОа достоверно коррелирует с уровнем маркера активации моно!гуклеаров DR .

Рецидив заболевания характеризуется прогрессией всех нарушений в соотношении цитокинов и цитокинпродуцирующих клеток, выявленных при АА. Так, повышению (как по сравнению с исходным уровнем в периферической крови» так и по сравнению с нормой в костном мозге) количества CD3+, CD4+, CD 16+ лимфоцитов и, прежде всего, уровня их активации (экспрессии, маркера DR), а также повышению величины иммунорегуляторного индекса (CD4+/CD8+), выявленным в рецидиве заболевания в периферической крови и костном мозге больных АА (рис. 10), соответствует достоверное увеличение продукции ИЛ-lp и ИЛ-2 и, прежде всего, сверхвысокая, доминирующая над всеми цитокинами, интенсивность синтеза негативного регулятора гемопоэза ФНОа при снижении продукции его антагониста ИЛ-4 (рисунок 11) .

–  –  –

РисЛ 0. Иммуиофеиотипичсская характеристика цитокшшродуцнрующих клеток периферической крови (п/к) и костного мозга (К/'м) в динамике заболевания Выявленная динамика цитокинов в совокупности с повышением иммунорегуляторнопго индекса (CD4+/CD3+) свидетельствует о том, что в рецидиве заболевания активируется, прежде всего, субпопуляция Т-хеяперов I класса (ТЫ) .

Стадия полной клинико-гематологической ремиссии характеризуется •*•**•-••

–  –  –

Примечание: МАЛ/МЫ - показатель, характеризующий во сколько раз спонтанная продукция цитокина при АА (МАА) превышает норму (Мы) Рис. Н. Соотношение основных оппозитшдх цитокинов, продуцируемых мононуклеарами периферической крови (п/к) и костного мозга (к/м) больных АА, в динамике заболевания тенденцией к нормализации в соотношении цитокинов и цитокинггоодуцирующих клеток. Так, достоверному, но сравнению с рецидивом, снижению уровня практически всех субпопуляций (за исключением CD8+ клеток) и, прежде всего, уровня их активации, а также уменьшению (вплоть до инверсии) величины иммунорегуляторного индекса (CD4+/CD8+1), выявленным в стадии полной ремиссии в периферической крови и костном мозге больных АА (рисунок 10), соответствует смещение приоритетов в продукции дитокинов мононуклеарами больных с негативного регулятора ФНОа в сторону ИЛ-б (рисунок 11). Интенсивность синтеза данного позитивного фактора становится преобладающей над синтезом других цитокинов, как это было выявлено в норме. Однако даже в стадии полной клинкко-гематологической ремиссии уровень продукции ФНОа мононуклеарами и периферической крови, и костного мозга больных остается повышенным, как и экспрессия коррелирующего с ним маркера активации DR .

Анализ динамики основных регуляторов гемопоэза в процессе иммуносупрессивной терапии больных, а также их соотношение в состоянии полной клинико-гематологическон ремиссии и при рецидиве заболевания, подтверждает гипотезу о нарушении иммунной регуляции гемопоэза при АА, механизмом которого служит цитокипопосредованная иммуносупрессия .

То обстоятельство, что тенденции в динамике цитокинов, выявленные в первые месяцы эффективной иммуносупрессивной терапии, сохраняются и наиболее ярко проявляются в состоянии полной ремиссии, а тенденции, выявленные в первые месяцы неэффективной терапии, как правило, паиболее ярко проявляются при рецидиве заболевания, позволяет использовать динамику уровня цитокинов в течение первых месяцев лечения в качестве критерия эффективности проводимой иммуносупрессивной терапии и ранних прогностических заключений о ходе заболевания .

Таким образом, на основании комплексного анализа выявленных взаимосвязей между нарушениями цитокинового, иммунного статусов и тяжестью депрессии гемопоэза установлена роль иммунной системы в развитии аплазии кроветворения при АА. Показано, что одним из ведущих механизмов, лежащих в оспове угнетения гемопоэза при данном заболевании, является цитокинопосредованная иммуносупрессия, обусловленная нарушением синтеза и соотношения основных регуляторных цитокинов, продуцируемых клетками иммунной сисгемы - мононуклеарами периферической крови и костного мозга больных. Установлено, что депрессия кроветворения при АА вызвала не снижением секреции стимулирующих гемопоэтических факторов (ИЛ-ip, ИЛ-3, ИЛ-б), но, вопервых, сверхвысокой продукцией ингибиторного цитокина ФНОа, который, при недостаточности своего антагониста ИЛ-4, способствует развитию депрессии гемопоэза, снижая чувствительность клеток-предшественников к гемопоэтическим факторам и активируя процессы апоптоза, - к, во-вторых, повышенной продукцией ИЛ-2, обеспечивающего сохранность и пролиферацию Т-лимфоцитов, активированные формы которых, в свою очередь» являются продуцентами негативных гемопоэтических факторов .

ВЫВОДЫ

1. Одним из ведущих механизмов формирования депрессии кроветворения при апластической анемии, является цитокшюпосредованная иммуносупрессия, обусловленная нарушением синтеза и соотношения основных регуляторных цитокинов, продуцируемых клетками иммунной системы — мононуклеарами периферической крови и костного мозга больных апластической анемией .

2. Продукция мультиколониестимулирующего фактора ИЛ-3, ИЛ-1р и ИЛ-6 мононуклеарами периферической крови и костного мозга, а также уровень ЭПО при апластической анемии являются либо сопоставимыми с нормой, либо повышегпгыми. Это свидетельствует об отсутствии связи депрессий кроветворения при данном заболевании с недостаточным синтезом позитивных гемопоэтических факторов .

3. В норме интенсивность синтеза позитивного фактора ИЛ-6 превалирует над продукцией других цитокинов, тогда как при апластической анемии приоритеты в синтезе гемопоэтических факторов смещены в сторону негативного цитокипа ФНОа, спонтанная продукция которого превышает норму более, чем в 10 раз .

4. Положительная связь между интенсивностью синтеза ФНОа и тяжестью нарушения гемопоэза у больных тяжелой и нетяжелой формами АА свидетельствует о патогенетической роли данного ингибиторного цитокина в формировании депрессии кроветворения при данном заболевании,

5. Субпопуляция CD4+ Т-хелперов 1 типа (ТЫ) является преобладающей при тяжелой форме АА и существенно увеличивается в рецидиве заболевания .

6. Выявлена положительная коррелятивная связь между продукцией мононуклеарами больных АА аиоптогенного цитокииа ФНОа и экспрессией маркеров активации (DR) и апоптоза (Fas/CD95) .

7. Повышенная продукция мононуклеарами периферической крови и костного мозга ИЛ-2 - фактора роста Т-лимфоцитов и аптиапоптотического цитокииа — в сочетании с увеличенной экспрессией на них рецептора для ИЛ-2 - CD25 обеспечивает пролиферацию лимфоидных клеток и их защиту от апоптогенного влияния ФНОа .

8. Рецидив заболевания характеризуется прогрессией всех нарушений в соотношении цитокинов и цитокинпродуцируюших клеток, выявленных при АА в периферической крови и костном мозге. Повышению уровня лимфоидных субпопуляций (CD3+, CD4+, CD16+), экспрессии маркера активации DR и величины иммунорегуляторного индекса соответствует увеличение продукции ИЛ-ip и ИЛ-2 и сверхвысокая интепсивность синтеза ФНОа при снижении продукции его антагониста - ИЛ-4 .

9. Полная клипико-гематблогическая ремиссия характеризуется тенденцией к нормализации в соотношении цитокинов и цитокинпродуцирующих клеток периферической крови и костцого мозга. Снижению экспрессии маркера активации DR, а также уменьшению (вплоть до инверсии) величины иммунорегуляторного индекса соответствует смещение приоритетов в продукции гемопозтических факторов с негативного регулятора ФНОа в сторону ИЛ-6, однако даже в состоянии ремиссии продукция ФНОа клетками иммунной системы остается повышенной .

10. Определена прогностическая значимость динамики основных регуляториых цитокинов в процессе иммуносупрессивной терапии больных апластической анемией: снижение спонтанной продукции ФНОа, а также фактора роста Т-лимфоцитов - ИЛ-2 с одновременным восстановлением и активацией положительного фактора ИЛ-6 в течение первого месяца лечения является благоприятным прогностическим фактором, свидетельствующим об адекватной иммуносупрессивной терапии .

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При проведении периичнога обследования больных апластической анемией в дополнение к традиционным (морфологическим, гистологическим и др.) лабораторным исследованиям рекомендуется определять некоторые показатели цитокинового и иммунного статуса больных:

- исследование питокинов включает в себя определение спонтанной (обязательное) и индуцированной (желательное) продукции клеткми иммунной системы (мононуклеарами периферической крови и/или костного могза), прежде всего, ингибирующего цитокина ФНОа и, далее по степени важности, ИЛ-2, ИЛ-б и ИЛ-1 0;

- исследование иммунного статуса носит факультативпый характер, может проводиться при отсутствии возможности определения продукции цитокииов и должпо быть направлено на определение иммунофенотипйческой характеристики основных цитокилпродуцирующих клеток: выявление CD3+, CD4+, CD8+, CD 16+ мононуклеаров периферической крови и, особенно, костного мозга, но,- прежде всего, соотношения иммунорегуляторпых субпопуляций (нммунорегуляторного индекса CD4-t/CD8+) и наличия маркера активации DR .

2. Повышение величины нммунорегуляторного индекса (CD44/CD8+ ~1,5 и более) при увеличении количества активированных мононуклеаров (DR+ клеток) в сочетании со сверхвысокой спонтанной продукцией ФНОа (~ в 10раз) и повышенной ИЛ-2 (в 3-8 раз) характеризует тяжелую форму заболевания .

3. Особое внимание следуег обращать на динамику. цитокииов в процессе терапии: снижение спонтанной продукции, прежде всего, негативного регулятора гемопоэза ФНОа, а также фактора роста Т-лимфоцитов - ИЛ-2 с одновременным восстановлением и активацией положительного фактора ЙЛв течение первого месяца лечения можно рассматривать как благоприятный прогностический фактор, свидетельствующий об адекватной иммуносупрессивной терапии; повышение спонтанной продукции негативного регулятора ФНОа, и фактора роста Т-лимфоцитов - ИЛ-2 с ослаблением реактогенного потенциала клеток в отношении позитивного фактора ИЛ-6 в течение первого месяца лечения, свидетельствуют о неэффективной иммуносупрессивной терапии .

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Rozanova О. Lymphocyte subpopulations and serum TNFa level in patients with aplastic anaemia in antilymphocyte globulin treatment/ O.Rozanova, L.Bubnova, T.Glazanova, T.Popova, A.Ganapiev// 12 Meeting of the International Society of Haematology. - Austria. - 1993. - P. 65 .

2. Bubnova L. Serum TNFa and IL-18 levels in haematological patients and during BMT/ L.Bubnova, O.Rozanova, T.Glazanova, I.Pavlova, N. Kalinina, S.Moiseev// 19 Annual Meeting of the EBMT. - Germany. ~ 1993. - P.25 .

3. Rozanova O. Peripheral lymphoid subsets and serum cytokine level in patients with aplastic anaemia during ALG-therapy/ O.Rozanova, L.Bubnova, T.Glazanova, LPavlova, E.Shilova, A.Ganapiev// 1st Meeting of the European Haematology Association. - Belgium. - 1994. - P.83 .

4. Ganapiev A. New method of irnmunomodulation therapy by ultraviolet irradiation. for treatment with, aplastic anemia/ A.Ganapiev, S.Moiseev, O.Rozanova// I й Meeting of the European Haematology Association. - Belgium. P. 124 .

5. Ganapiev A. The method of immunosuppression by ultraviolet irradiation in patients with aplastic anaemia/ A.Ganapiev, S.Moiseev, O.Rozanova, I.Pavlova, T.glazanova, FLAbdulkadirov // 20 Annual Meeting of the EBMT. - UK. - 1994. P.211 .

6. Bubnova L. Autologous BMT: serum TNF level and lymphoid subsets/ L.Bubnova, O.Rozanova, T.Glazanova, LPavlova, K..Abdulkadirov// XXII Meeting of ISOBM. - Groningen. - 1994. - P.206 .

7. Ганапиев А. Динамика показателей иммунитета у больных агшастической анемией в процессе АЛГ-терапии/ АХанапиев, Л.Бубиова, О.Розанова, Т.Глазанова, И.Павлова, Е.Шилова// Актуальные вопросы гематологии и трансфузиологии: Тез. докл. - Баку, 1994. - С. 15-16 .

8. Ганапиев А.А. Результаты лечения больных агшастической анемией различными дозами антилимфоцитарного глобулина/ А.А.Ганапиев, К.М.Абдулкадыров, Е.Р.Шилова, Т.И.Попова, О.Е.Розанова, Ю.Л.Кацадзе// Терапевтический архив. - 1995,- №8.-С.51-54 .

9. Абдулкадыров К.М. Морфологические и патогенетические аспекты апластической анемии/ К.М.Абдулкадыров, С.С.Бессмельцев, В.А.Балашова, О.А.Рукавицын, Е.Р.Шидова, О.Е.Розанова, Л.Н.Бубнова// Морфология! Т. 108,Х°3.-С. 58-62 .

10. Гаиапиев А. Новый метод иммуиомоделирующей терапии аиластической анемик с помощью ультрафиолетового облучения крови/ А.Гапапиев, С.Монсеев, О.Розанова, ТХлазанова, И.Павлова, С.Тиранова, К.Абдулкадыров// Матер. 3" Всероссийск. конфереиц. гематол. и трансфузиол., СПб, 1995: Тез. Докл. - СПб, 1995. - С. 384-386 .

11. Bubnova L. Effect of ALG and UV irradiation treatment on scrum cytokine level in aplastic anaemia/ L.Bubnova, O.Rozanova, T.Glazanova, I.Pavlova, A.Ganapiev, ICAbdulkadirov// Experimental Hematology. - 1995. - V. 23, № 8. P. 912 .

12. Bubnova L. TNFa in vitro influence on the cells of patients with aplastic anaemia/ L. Bubnova, O.Rozanova, T.Glazanova, I.Pavlova, K.Abdulkadirov// Experimental Hematology. - 1996.-V. 24, № 9. - P. 1103 .

13. Bubnova L. Immunologic monitoring in patients with autologous bone marrow transplantation/ L.Bubnova, T.Glazanova, O.Rozanova, I.Pavlova, S.Moiseev, K.Abdulkadirov// Human immunology. -1996 - Vol. 47, N 1-2. - P. 134 .

14. Розанова О.Е. Влияние ФНОа па клетки больных апластической анемией в опытах in vitro/ О.Е.Розанова, Л.Н.Бубнова, Т.В.Глазанова, И.Е.Иавлоиа, СИ.Моисеев// Актуальные вопросы гематологии и трансфузиологии: Матер .

III Всероссийского съезда гематол. и траыеф. - СПб., 1996. - С. 14. Бубнова Л.Н. Иммуномониторинг и иммунореконститупия реципиентов аллогетюго костного мозга/ Л.КБубнова, Т.В.Глазаггова, О.Е.Розанова, И.Е.Павлова, С.И.Моисеев, К.М.Абдулкадыров// Вопросы онкологии. - 1996 .

-Т.42,№4.-С.36-39 .

16. Ganapiev A. The immunomodulation mechanisms of blood ultraviolet irradiation in patients with aplastic anemia/ A.Ganapiev; S.Moiseev, O.Rozanova, L.Ribakova, T.Glazanova, L.Bubnova// Bone Marrow Transplantation. - 1997. — V. 19,suppl. 1.-РЛ06 .

17. Rozanova O. Serum IL-ip and TNFa level and its cell production in aplastic anaemia/ O.Rozanova, T.Glazanova, L.Bubnova, I.Pavlova, KLAbduIkadirov// 26th Annual Meeting of the International Society of Experimental Hematology. •Cannes - 1997.- abstr. № 134 .

18. Rozanova O. Impaired TNF, IL-1 and IL-2 production by mononuclear cells in patients with aplastic anaemia/ O.Rozanjva, T.Glazanova, I.Pavlova, L.Bubnova, K.Abdulkadirov// 27th Annual Meeting of the International Society of Experimental Hematology. - Vancouver. - 1998. - abstr.N 407 .

19. Абдулкадыров К.М. Динамика клинико-лабораториых показателен у больных апластической анемией в процессе лечения циклоспорином А (сандимуном)/ К.М.Абдулкадыров, Т.И.Иопова, Е.Р.Шилова, Л.Н.Бубнова, О.Е.Розанова, М.Н.Зенина, Ю.Л.Кацадзе// 36ipnHK наукових* працъ ствробтнпав КМАПО iM. ПЛ.Щупика, - Киев. - 1999. - вып.8, книга 1. - С .

5-9 .

20. Rozanova О. TNFa, IL-1 p and IL-2 production by peripheral and bone marrow mononuclear cells in patients with aplastic anaemia/ O.Rozanova, T.Glazanova, L.Bubnova, I. Pavlova, K.Abdulkadirov, T.Popova// 4th Congress of the European Haematology Association. - Spain. - 1999. - abstr. № PO-0848 .

21. Ganapiev A. Sufficient decrease in CD16+, CD38+ and CD25+ lymphocytes after ex vivo ultraviolet irradiation of peripheral blood: a rationale for immunosuppressive UV theraoy in aplastic anemia// A.Ganapiev, O.Rozanova, L.Ribakova, T.Glazanova, I.Pavlova, B.Afanasiev, A.Chuhlovin// Bone Marrow Transplantation. - 1999. - V. 12, suppl. 2. - P.86 .

22. Розанова О,Е. Динамика уровня цитокинов в периферической крови и костном мозге больных апластической анемией в процессе терапии/ О.В.Розанова, Л.Н.Бубнова, Т.В.Глазанова, И.Е;Павлова, Е.Р.Шияова, Т.И.Попова, К.М.Абдулкадыров// Актуальные проблемы гематологии и трансфузиологии: Матер, науч.-практич. копф. - Мипск. - 2000. - С. 35-38 .

23. Rozanova О. The dynamics of cytokine level during the therapy of aplastic anaemia with cyclosporin A (CsA)/ O.Rozanova, T.Glazanjva, I.Pavlova, L.Bubnova, T.Shilova, K.Abdulkadirov// The Hematology Journal - 2000. - V. 1, suppl. 1. - P. 45 .

24. Абдулкадыров К.М. Комплексная оценка уровня цитокинов в периферической крови и костном мозге больных апластической анемией при прогнозировании течения заболевания/ К.М.Абдулкадыров, Л.Н.Бубнова, О.Е.Розанова, Т.В.Глазанова, И.ЕЛавлова, Т.И.Попова, Е.Р.Шилова// Методические рекомендации, утвержденные МЗ РФ. - 2001. - 17 с .

25. Розанова О.Е. Продукция цитокинов клетками периферической крови и костного мозга больных апластической анемией/ О.Е.Розанова, Л.Н.Бубнова, Т.В.Глазанова, И.Е.Павлова, К.М.Абдулкадыров// Русский журнал «ВИЧ/СПИД и родственные проблемы».-2001,-Т. 5, № 1. - С. 58-59 .

26. Бахтин С И. Влияние Т-лимфоцитов на восстановление гемопоэза после трансплантации аутологичных стволовых клеток/ С.И.Бахтин., Т.ВХлазанова, О.Е.Розанова, И.Е.Павлова, С.И.Моисеев// Медицинская иммунология. — 200I.-T.3.-J&2.-С.304 .

27. Розанова О.Е. Содержание эритропоэтина в сыворотке больных апластической анемией/ О.Е.Розанова, Л.Н.Бубнова, Т.В.Глазанова, И.Е.Павлова, Е.Р.Шилова, Т.И.Попова// Актуальные вопросы гематологии и трансфузиологии: Матер, науч.-практич. конф. - СПб. - 2002. - С. 257 .

28. Грицаев С В. Спонтанная продукция цитокинов мононуклеарными клетками периферической крови как маркер эффективности терапии циклоспорином А больных миелодиспластическим синдромом/ СВ.Грицаев, О.Е.Розанова, С.СБессмельцев, Л.Н.Бубнова, К.М.А6дулкадыров// Актуальные воггросы гематологии и трансфузиологии: Матер, науч.-практич .

конф. - СПб. - 2002. - С. 109-110 .

29. Розанова О.Е. Продукция некоторых гемопоэтических факторов у больных апластической анемией/ О.Е.Розанова, Л.Н.Бубнова, Т.В.Глазанова, И.ЕЛавлова// Медицинская иммунология:

- 2002. - Т. 4, № 2. - С. 16—161 .

30. Rozanova О. Synthesis of some hemopoietic factors in patients with aplastic anaemia/ O.Rozanova, L.Bubnova, T.Glazanova, I.Pavlova// The Hematology Journal. - 2002. - V. 1, suppl. 1. - astr. № 1444 .

31. Розанова О.Е. Синтез некоторых цитокинов - позитивных и негативных регуляторов гемопоэза - у больных апластической анемией/ О.Е.Розанова, Л.Н.Бубнова// Медицинская иммунология. - 2003. - Т. 5, № 3-4. - С. 441-442 .

32. Розанова О.Е. Синтез некоторых гемопоэтических факторов у больных алластической анемией / О.Е.Розанова, Л.Н.Бубнова // Актуальные вопросы гематологии и трансфузиологии: Матер. V Съезда гематологов и трансфузиологов респ. Беларусь. - Минск. - 2003. - T J. - С. П 1-114 .

33. Розанова О.Е. Продукция ИЛ-2 и ИЛ-4 моионуклеарами периферической крови и костного мозга больных апластической анемией/ О.Е.Розанова, Л.Н.Бубнова, Е.Р.Шилова, К.М.Абдулкадыров// Актуальные вопросы гематологии и трансфузиологии: Матер, науч.-практич. конф. - 2004. - СПб. С. 78 .

34. Розанова О.Е. Соотношение и синтез некоторых цитокипов - регуляторов гемопоэза у больных апластической анемией/ О.Е. Розанова// Медицинская иммунология. - 2004. - Т. 6, № 3-5. - С354-355 .

35. Розанова О.Е. Продукция IL-3 мопопуклеарами периферической крови и костного мозга больных апластической анемией/ О.Е.Розапова// Медицинская иммунология. - 2005. - Т. 7, Кг 2-3. - С. 319 .

36. Грицаев СВ. Клиническое значение отдельных субпопуляций лимфоцитов и цитокинпродуцирующей активности клеток крови больных первичпым миелодиспластическим синдромом/ С.В.Грицаев, О.Е.Розанова, Абдулкадыров К.М., Бубнова Л.Н., Тиранова С.А.// Вопросы онкологии. — 2005.-№ 5. - С. 563-566 .

37. Розанова О.Е. Способность мопонуклеаров периферической крови и костпого мозга больных апластической анемией к продукции мультиколониестимулирующего фактора - интерлейкина 3/ О.Е.Розанова// Медицинская иммунология. — 2005.'"—'Т. 7, №4. - С. 421-424 .

38. Розанова О.Е. Цитокипопосредованные аспекты иммупопатогепеза апластической анемии/ О.Е.Розанова, Л.Н.Бубнова// Цитокииы и воспаление .

- 2005. - Т. 4, № 4. - С. 34-38 .






Похожие работы:

«Известия Челябинского научного центра, вып. 2 (32), 2006 МЕДИКО–БИОЛОГИЧЕСКИЕ ПРОБЛЕМЫ УДК.612.014.482 АНТИОКСИДАНТНЫЙ СТАТУС КЛЕТОК СЕЛЕЗЕНКИ МЫШЕЙ СВА, ПОДВЕРГАВШИХСЯ ГАММА–ОБЛУЧЕНИЮ В ТЕЧЕНИЕ ЖИЗНЕННОГО ЦИКЛА А.А. Устинова e–mail: suddha_n...»

«Утверждаю Главный государственный санитарный врач Российской Федерации Г.Г.ОНИЩЕНКО 15 октября 1998 года Дата введения января 1999 года 2.3.2. ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ И ПИЩЕВЫЕ ДОБАВКИ ОПРЕДЕЛЕ...»

«ЦНИИатоминформ-ОН-2 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ АТОМНОЙ ЭНЕРГИИ СССР НАЦИОНАЛЬНАЯ КОМИССИЯ ПО РАДИАЦИОННОЙ ЗАЩИТЕ ПРИ МИНИСТЕРСТВЕ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР GENETIC EFFECTS OF RADIONUCUDE DECAY Tott \KFoftH -QN-Z-86. Москва— 1986 ЦНИИатом...»

«Российская академия наук НАУЧНЫЙ СОВЕТ ПО КЛЕТОЧНОЙ БИОЛОГИИ И ИММУНОЛОГИИ СОВЕТ ПО МОЛЕКУЛЯРНОЙ И КЛЕТОЧНОЙ БИОЛОГИИ САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКОГО НАУЧНОГО ЦЕНТРА ИНСТИТУТ ЦИТОЛОГИИ ОБЩЕСТВО КЛЕТОЧНОЙ БИОЛОГИИ ПРОГРАММА XVI Всероссийского симпозиума "Структура и функции к...»

«Н. В. Ильмаст, С. П. Китаев, Я. А. Кучко, С. П. Павловский Российсая аадемия на Карельсий начный центр Инститт биолоии Н.В. ИЛЬМАСТ, С.П. КИТАЕВ, Я.А. КУЧКО, С.А. ПАВЛОВСКИЙ ГИДРОЭКОЛОГИЯ РАЗНОТИПНЫХ ОЗЕР ЮЖНОЙ КАРЕЛИИ Петрозаводс УДК 574.58(470.22) Н.В. Ильм...»

«$U4toQ&4S сообцения объединеииого института ядерных шледеший дубиа 9-81-440 В.П.Заболотин, Л.П.Зиновьев, А.С.Исаев, i И.И.Карпов, Л.Г.Макаров, В.Н.Перфеев, I И.Н.Семеиюшкин, В.Ф.Сиколенко, В.Л.Тищенко, ! С.В.Федуков, В.И.Черников, Д.И.Шерстя...»

«УДК 577.4:631.4:614.876:539.16 ФОРМЫ НАХОЖДЕНИЯ 90Sr В ПОЧВАХ ИСПЫТАТЕЛЬНОЙ ПЛОЩАДКИ БОЕВЫХ РАДИОАКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ НА СЕМИПАЛАТИНСКОМ ИСПЫТАТЕЛЬНОМ ПОЛИГОНЕ Кундузбаева А.Е.1, Кабдыракова А.М.1, Лукашенко С.Н...»

«РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК СИБИРСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ ВОСТОЧНО-СИБИРСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР ЭКОЛОГИИ ЧЕЛОВЕКА Научно-исследовательский институт медицины труда и экологии человека Библиографический указатель научных раб...»




 
2019 www.mash.dobrota.biz - «Бесплатная электронная библиотека - онлайн публикации»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.